①：ELISA實(shí)驗(yàn)中樣品都要做復(fù)孔或三孔，然后計(jì)算每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)品的平均OD值，復(fù)孔的變異系數(shù)應(yīng)該小于20%。

　?、冢浩骄鵒D值減去空白孔的OD值。

　　③：制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　以減去本底后的OD值為X軸，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為Y軸，利用作圖軟件得出一個(gè)合適的計(jì)算方法。建議使用合適的軟件來作圖，比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法（比如直線、半對數(shù)、對數(shù)、四參數(shù)方程等）并從中選擇一條zui合適的方程。要想檢驗(yàn)?zāi)硹l曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合，可以將標(biāo)準(zhǔn)品的濃度作為未知數(shù)，將對應(yīng)的OD值帶入該方程，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品的濃度，得到的結(jié)果應(yīng)該與實(shí)際濃度很接近（+/-10%）。選擇擬合度zui高的那條曲線。

　　如果出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性不好，或平行性不好（雙孔對照孔的OD值差別很大），或出現(xiàn)跳孔的現(xiàn)象，可能引起的原因有酶標(biāo)板孔間相互污染、洗板后未能盡快進(jìn)行下一步操作、添加樣品或其它試劑時(shí)操作的方法不對、孵育位置避光性不佳或蓋板膜沒有密封好使得水分蒸發(fā)、酶標(biāo)板孔問加入的試劑量不同，相對應(yīng)的解決辦法是加樣時(shí)請小心勿將液體濺人另一孔中，人工洗板時(shí)也請小心，勿將洗滌液濺人另一微孔中、在洗板后及時(shí)進(jìn)行下一步操作、添加試劑時(shí)請懸空滴入，切記勿將槍頭接觸到板孔內(nèi)，吸取不同試劑瓶中的液體時(shí)就要更換一次槍頭、確認(rèn)孵育環(huán)境不透光，蓋板膜將酶標(biāo)板密封好、使用已校正過的微量加樣器，如將*次加入液體時(shí)槍頭上留有一滴的液體滴下，那么將以后槍頭上留有的液體也滴下，以保證加入液體體積的一致性。